آمار مطالب
کل مطالب : 8835
آمار کاربران
آمار بازدید
تبلیغات شما
| بررسی امکان طراحی روش RT – PCR برای تشخیص ازدیاد بیان ژنی ژن HER2 در نمونه های توموری بدخیم پستان
هدف از این رساله بررسی امکان طراحی روش RT – PCR برای تشخیص ازدیاد بیان ژنی ژن HER2 در نمونه های توموری بدخیم پستان می باشد |
 |
| دسته بندی | پزشکی |
| فرمت فایل | doc |
| حجم فایل | 1034 کیلو بایت |
| تعداد صفحات فایل | 102 |
رساله دکترای رشته پزشکی
بررسی امکان طراحی روش RT – PCR برای تشخیص ازدیاد بیان ژنی ژن HER2 در نمونه های توموری بدخیم پستان
چکیده:
سرطان پستان از شایع ترین سرطان های زنان است که سبب مرگ زنان زیادی می شود. موتاسیون های بسیاری نظیر ازدیاد آنکوژن ها و یا حذف ژن های سرکوبگر تومور در این سرطان شناسایی شده اند؛ در بین آنکوژن ها، erb-B2 که به خانواده EGFR (گیرنده فاکتور رشد اپیدرمی) تعلق دارد در 30%-25% تومورهای پستان با منشاء سلول های داکتال ازدیاد پیدا می کند. (80% سرطان های پستان منشا داکتال دارند.)در بیمارانی که erb-B2 در آن ها ازدیاد پیدا کرده بیماری می تواند تا حدی با استفاده از یک آنتی بادی مونوکلنال انسانی شده علیه محصول پروتئینی ژن erb-B2 به نام هرسپتین مهار شود.از این رو شناسایی تومورها یی که erb-B2 در آن ها ازدیاد پیدا کرده اهمیت دارد.روش روتین در شناسایی این تومورها ایمونوهیستوشیمی (IHC) می باشد.
در این مطالعه 50 نمونه از بیمارستان دی جمع آوری شد که بر اساس نتایج IHC، 32% نمونه ها ازدیاد آنکوژن erb-B2 را نشان می دادند.جهت مقایسه RT-PCR و IHC، RNA این نمونه ها استخراج شد و RT-PCR برای آن ها انجام شد که در آن دو جفت پرایمر طراحی شده به طور همزمان ژن erb-B2 را به همراه ژن بتاگلوبین به عنوان کنترل داخلی تکثیر می کردند؛ سپس محصولات RT-PCR بر روی ژل آگاروز برده شدند و شدت باند های مربوط به erb-B2 و کنترل داخلی با یکدیگر مقایسه گردید. در نهایت از مقایسه نتایج حاصله از RT-PCR با نتایج IHC مشخص شد که بازده RT-PCR در تشخیص نمونه های با درجه IHC 3+، 100% و در مورد نمونه های 2+، نیز 100% می باشد. همچنین آزمایش PCR بر روی DNA استخراج شده از بافت توموری و DNA نرمال استخراج شده از بافت فرد سالم انجام گرفت که نتایج مربوط به این آزمایش نیز نتایج بدست آمده از RT-PCR را تایید می کردند.
کلمات کلیدی:
سرطان
داکتال
آنکوژن ها
موتاسیون
سرطان پستان
سرطان های زنان
مقایسه RT-PCR و IHC، RNA
مقدمه:
در پستان نرمال، داکتها و لوبولها بوسیله دو نوع سلول فرش می شوند یک دسته سلول های مسطح که یک لایه ناپیوسته از سلول های قابل انقباض حاوی میوفیلامان ها هستند (سلول های میواپی تلیال ) و روی غشای پایه قرار دارند . این سلول ها در خروج شیر در طی دوره شیر سازی همکاری می کنند و نقش مهمی در حفظ ساختار و عملکرد نرمال لوبول ها و غشای پایه دارند (86). لایه دومی از سلول‌های پوششی کف لومن را فرش کرده است ( سلول های لومینال ).
داکت های انتهایی و لوبولها شیرتولید می کنند ولی سلول های بخشهای دیگر داکت، در تولید شیر نقشی ندارند.منشأ سلول های لومینال و اپیتلیال ، سلول های بنیادی واقع در ترمینال داکت ها در نظر گرفته می شود(6). بخش اصلی بستر پستان از بافت پیوندی فیبروس متراکم مخلوط با بافت چربی تشکیل شده است که همان بستره بین لوبولی است. لوبولها بوسیله یک بستره ظریف احاطه شده اند که بافت ویژه پستان است و خصوصیات پاسخ دهنده به هورمون دارد و دارای تعدادی لنفوسیت می باشد (85).
فهرست مطالب
چکیده:1
فصل اول:مقدمه5
1-1- غدد پستانی6
1-1-1- ساختار پستان نرمال6
شکل (1-1 )- ساختار پستان نرمال (55)7
1-1-2- تغییرات پستان در چرخه زندگی8
1-2 -کارسینومای پستان10
1-2-1-کارسینوما10
1-2-2- ریسک فاکتورها12
1-2-3- سبب شناسی سرطان پستان16
1-2-5- سرطان پستان غیر وراثتی19
1-2-5-1-2- تومور ساپرسورها21
1-2-5-1-4- مسیرهای بقای سلولی و مرگ سلولی23
1-2-5-1-4-1- تلومراز23
1-2-5-1-4-2- ژن های وابسته به آپوپتوز24
1-2-6-1- طبقه بندی کارسینوماهای پستان بر اساس مطالعات میکرواری (از لحاظ ملکولی)26
1-2-6-1-1-کارسینوماهای ER- مثبت26
1-2-6-1-2-کارسینومای های ER- منفی26
1-2-6-1-3-کارسینوماهای Basal-like27
1-2-6-1-4-کارسینوماهای HER2/neu- مثبت27
شکل 1-3- نمای شماتیک خانواده HER (90)28
1-2-7- طبقه بندی کارسینوماهای پستان از لحاظ بافت شناسی31
1-2-7-1- کارسینوما های در جا و تهاجمی(شکل 1-6 )31
شکل (1-5) – کارسینوماهای درجا و تهاجمی (85)32
فصل دوم:مروری بر مطالعات انجام شده34
2-1- تکنیک های سنجش HER2/neu35
2-1-1- ایمونوهیستوشیمی (IHC)35
2-1-2- ساترن و اسلات بلات37
2-1-3-تکنیک FISH37
2-1-4- تکنیک CISH ) (Chromogenic in situ hybridization38
2-1-5- تکنیک ( Enzime – linked immunosorbent assay ) ELISA38
2-2- وضعیت HER2 و پیشگویی پاسخ به درمان با هرسپتین40
2-3- HER2/neu فسفریله به عنوان یک مارکرپروگنوستیک و پیش گویی بالقوه41
2-4- سنجش بخش خارج سلولی HER2 در جریان خون به عنوان تومور مارکر41
2-5- خلاصه42
2-2- هدف43
فصل سوم:مواد و روشها44
مواد و روشها44
3-1- استخراج RNA ی كل از بافت45
3-2- بررسی كمی و كیفی RNA ی استخراج شده50
3-2-1- UV اسپكتروفتومتری50
3-2-2- الكتروفورز ژل آگارز (106)52
طرز تهیه محلول ها و بافرهای مورد نیاز در الكتروفورز :53
محلول اتیدیوم بروماید (10 mg /ml)54
مواد و وسایل لازم55
جدول 3-1 – رابطه درصد ژل آگارژ با اندازه مولكول DNA58
3-3 تیمار RNAی استخراج شده با آنزیم DNase [149]58
طرز تهیه مخلوط dNTP از هر یك از نوكلئوتیدها60
3-5- واكنش PCR [2]63
3-5-1 طراحی پرایمر:63
3-5-2- آماده سازی پرایمرهای PCR [2]66
3-7- استخراج DNA از بافت پستانداران با استفاده از Accuprep Genomic DNA Extraction kit (Bioneer)70
3-7-1- سنجش غلظت DNA71
3-9- ایمنوهیستوشیمی Immunohistochemical (IHC) Techniques73
فصل چهارم:بحث و نتایج76
بحث و نتایج76
4-1- نتایج77
4-1-1- تعیین کیفیت و کمیت RNA ی استخراجی77
4-1-2- بهینه سازی واکنش PCR78
4-1-3- RT - PCR80
4-2- بحث و پیشنهادات84
4-2-1- بحث84
4-2-2- علت انتخاب RT- PCR85
4-2-4- پیشنهادات87
منابع88
